视网膜色素上皮细胞
上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜， 因此培养在有胶原的底物上可能利于生长， 另外人或小鼠表皮细胞培养在以 3T3 细胞为饲养层（用射线照射后）时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低 PH、Ca2+含量和温度，向培养基中加入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。以表皮细胞为例， 用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞， 其法如下：
1、 取材：外科植皮或手术残余皮肤小块， 早产流产儿皮肤更好， 取角化层薄者， 切成 0.5－1 平方厘米小块。
2、置 0.02%EDTA 中，室温，5 分钟。
3、换入 0.25%胰蛋白酶中，4℃过夜。
4、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。
5、取出表皮，剪成更小的块后，置 0.25%胰酶中，37℃，30—60 分钟。
6、反复吹打，制成悬液。
7、培养：用 80 目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸去上清。
8、直接加入培养基（Eagle 加 20%小牛血清）制成细胞悬液，接种入培养瓶，CO2 温箱培养。
人
脑微血管内皮细胞
内皮细胞易于从大血管分离培养成单层细胞，对于研究内皮细胞再生、肿瘤促血管生长因子（TAF）等有很大价值。研究人内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法最为简便，其法如下：
1、产后新鲜脐带，无菌剪取 10—15 厘米长一段，如不能立即培养，可于 12 小 时内保存于 4℃。
2、用三通注射器吸取温 PBS 液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧， 以防液体返流。
3、用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入浓度为 0.1%的粗制胶原酶，充满血管，消化 3—10 分钟；注入口用线绳扎，以防液体返流。
4、吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温 PBS 轻轻反复冲洗后，一 并注入离心管中（此步骤可重复） 。
5、离心去上清，加入RPMI1640培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温 箱培养。两至三天可见细胞长成单层。
神经细胞培养
神经元与神经胶质细胞
神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象， 但很难使之增殖。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用 ROUS病毒和SV4等诱发转化。
一．设备：无菌操作设备。
二．大型设备
CO2培养箱：恒温5%、10%CO2维持培养液中pH值。
倒置显微镜：用于每天观察贴壁细胞生长情况。
解剖显微镜：用于准确地取材。
常温冰箱：-4℃，用于保存各种培养液，解剖液和鼠尾胶。
低温冰箱：-20℃--80℃，用于储存血清酶，贵重物品和试剂。
电热干烤箱：用于消毒玻璃器皿。高压消毒锅：用于消毒培养皿，手术器械。
过滤器：配制解剖液、培养液，必须过滤后才可使用，以去除细菌。
渗透压仪：pH剂，天平等。
三．培养器皿及手术器械
1.培养皿：常用35mm塑料及玻璃皿，解剖取材用15mm-90mm直径。
2.培养板：24-40孔，可用于开放培养。
3.培养瓶；
4.吸管：常用1，5，10mL，均需泡酸、洗涤、灭菌后方可使用。
5.各类培养液贮存器。
6.小型手术器械。
准备
一.配制培养液
（1）解剖液：以无机盐（去除Ca2+, Mg2+ ）加葡萄糖配制成PBS缓冲液，保持一定的渗透压和pH值。
（2）基础培养基（MEM）：主要为多种氨基酸，加入葡萄糖，双蒸馏水溶解。
（3）接种培养液：用于胰酶消化后的细胞分散，做成细胞悬液，其成分为MEM含1%谷氨酰胺，另加入10%马血清，当天配制。
（4）维持培养液：接种后24h，全部换成此液，后每2周换一次，每次换1/2。其成分为MEM中含5%马血清，1%谷氨酰胺，及适量的支持性营养物质。
二.培养基质
常用鼠尾胶、小牛皮胶，多聚赖氨酸，再涂胶。
三.消毒培养皿的备用
所有培养器皿均需清水冲洗2-3d，达两次ddH2O，每遍洗刷3-4次，加塞包装，置于烤箱中干燥消毒，于培养前1天进行。
神经细胞分散培养
（一）选材
常用胚胎动物或新生鼠神经组织。鸡胚常用胚龄6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不过也有认为与组织相关。如大白鼠胚胎以19d为宜，小鼠以18d为宜，大鼠纹状体以10d为宜；若纹状体与黑质联合培养的大鼠胚，则黑质以13d，纹状体18-21d为宜；小脑以20-21d小鼠胚胎，所获蒲氏细胞成活率高，颗粒细胞正在分化；脊髓与DRG联合培养，常用4-7d鸡胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神经成活率高。
（二）取材
脑则取出相应组织，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓则固定于琼脂板上，用小刀将其要成背腹两侧，分别培养。
（三）细胞分离与接种
神经组织用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接种液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用细口吸管吹打细胞悬液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上层细胞悬液，计数，预置细胞密度，接种于培养皿（1×106），做电生理应为5×105或更低。
（四）抑制胶质细胞生长
培养3-5d后，也有人认为培养7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神经胶质细胞的生长
人骨骼肌细胞
各种肌组织均可用于培养，以心肌和骨骼肌较实用。
骨骼肌细胞培养
1、出生 1 一 2 天的乳鼠，引颈处死。
2、无菌取大腿肌组织，切成 0.3 一 0.5cm2 小块后，用不含钙镁离子的 Hanks 液配的 0.25%胰蛋白酶消化，无菌纱网或纱布滤过。
3、计数调整细胞密度。
4、快接种量 2×106/皿入培养基培养。
5、培养基内含 10%胎牛血清，可加 1%的胎汁以促进分化。接种在胶原或胶原的底物上能促进细胞分化，明胶配置：用 Hanks 液配成 0.01% 明胶。该细胞接种率约 50%，细胞生长开始呈纺锤形，培养 50－52 小时后出现融合形 成肌细胞状多核纤维。数日后融合停止，此时可观察到横纹，一般在融合后二、三天内能见到收缩现象。
心肌细胞
心肌细胞是最早的培养材料，Carrel 曾长期培养过心肌组织，至今心肌仍不失为好的培养物，最常用的是鸡胚心肌。心肌比较容易培养和生长，可用悬滴培养、组织块培养和消化培养法，均可获良 好的效果。取心室肌培养较好，原代培养的鸡胚心肌呈纺锤形，培养成功时，一 周后可见节律性收缩现象。
巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的 重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细 胞群，在条件适宜下可生活 2－3 周，多用做原代培养，难以长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难 以建株。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞， 以小鼠腹腔取材法最为实用， 其法如下：1、实验前三天，向小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 lml（勿注入肠内！，以 ） 刺流产生大量的巨噬细胞。
2、引颈处死小鼠。
3、手提鼠尾将其全浸入 70%乙醇中 3－5 秒。
4、置动物于解剖台，用针头固定四肢，持镊撕开腹部皮肤，但勿伤及腹膜壁， 把皮肤拉向上下两侧，暴露出腹膜壁。
5、用 70%酒精擦洗腹膜壁，注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同时用手指从 两侧压揉腹膜壁，使液体在腹腔内流动。
6、 用针头轻挑起腹壁并微倾向一侧． 使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。
7、小心拔出针头，把液体注入离心管。
8、4℃下 250g 离心 10 分钟后，去上清，加 10ml Eagle 培养基。
9、计数细胞。每只鼠可产生 20 一 30×106 细胞，其中 90%为巨噬细胞。
10、以 3×105 个贴附细胞/平方厘米接种。
11、接种数小时后，除去培养液，可去除其它白细胞，纯化培养细胞，用 Eagle 液冲洗 1 一 2 次，再加新 Eagle 培养液置 CO2 温箱中。
SD 大鼠颈椎脱臼法处死，75%乙醇浸泡 1～2 分钟，2 次，置超净台内，打开腹腔取出肾脏剪碎，置含 Hank's 液的无菌培养皿洗涤，置 80 目不锈钢筛网上。
用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网，滤过组织 Hank's 液混合物用吸管吸至120目不锈钢筛网，滤过，去小组织块，滤过物吸至200目不锈钢筛网，轻轻滤过， Hank's液洗涤 次， 收集网上肾小球， 镜下观察为分离良好的肾小球。肾小球用 0.2%胰酶、0.1%胶原酶，37℃消化20 分钟，加血清终止胰酶反应，离心除去胶原酶。处理过的肾小球计数后接种至24孔培养板或25ml培养瓶，使肾小球大于60个/cm2，加培养基5～10ml（培养基组成：F12—3T3 上清 1：1；5% 马血清；2.5%胎牛血清；胰岛素 5μg/ml；25ng/ml 氢化可的松；5μg/ml转铁蛋白；25ng/ml 前列腺素 E1；甲状腺素 0.02ng/ml；D-缬氨酸 150ng/ml）肾小球培养 8～10 天，去除肾小球未生长组分，细胞继续培养 24 小时，形态学观察：细胞生长成单层多角型细胞，直径约 100μm。
